一种碱性果胶酶高产菌及其筛选方法和用该菌株发酵法生产碱性果胶酶：属于生物工程技术领域。本菌种为一株短小芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓｐｕｍｉｌｕｓ）ＣＣＴＣＣＮＯ：Ｍ２０３０４２，是从腐烂桔子表皮上经平板透明圈筛选而得。经液体深层发酵可得碱生果胶酶酶活２０ｕ／ｍｌ。该碱性果胶酶可用于棉纺织物精练处理。
发酵法制备碱性果胶酶过程中提高碱性果胶酶酶活的方法：属于生物酶制备技术领域。本发明通过控制氧气在发酵液中的传递速度体积溶氧系数（Ｋ↓［Ｌ］ａ），获得高酶活的碱性果胶酶。通过控制搅拌转速，达到合适的体积溶氧系数，经液体深层发酵，从而制备得到高酶活的碱性果胶酶，酶活达到４０ｕ／ｍｌ（国内未见报道），该法制得的碱性果胶酶活性高、成本低，同时发酵周期短、操作方法简便、易于工业化。发酵制备的碱性果胶酶以聚半乳糖醛酸裂解酶为主要成分，可用于棉纺织品的精练处理，有效地改变现有传统的棉纺织品精练处理工艺，改善环境和产品品质。
一种低温果胶酶菌株、低温果胶酶及其生产方法：一种产生低温果胶酶的指甲隐球酵母菌（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｎｕｉｇｕｔｔｕｌａｔｕｓ）和利用此菌株生产低温果胶酶的生产方法，同时还提供了低温果胶酶。通过利用指甲隐球酵母菌（ＣＧＭＣＣ．Ｎｏ．１４７２），建立菌种保藏、复壮及选育的系统方法，经过培养基配方优化筛选及发酵工艺条件优化控制，确立了稳定的发酵方法，生产的低温果胶酶具有良好的低温活性、高酶活。可广泛用于果蔬加工及酿造行业、麻品加工及棉纤维精加工、洗涤、饲料用酶、植物体有机物的制取等行业，并具有重要意义。
一株产碱性果胶酶工程菌及其构建和用该菌生产碱性果胶酶的方法：属于生物工程技术领域。本发明以非致病的芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ）ＷＳＨＢ０４－０２基因组ＤＮＡ为模板，采用ＰＣＲ扩增技术，获得包含１．２ｋｂ的编码碱性果胶酶基因片段的序列ｐｅｌ。同时从工业化生产的需要考虑，利用穿梭表达载体构建重组酵母菌Ｐｉｃｈｉａｐａｓｔｏｒｉｓ（ｐｅｌ）即为产碱性果胶酶（Ｅ．Ｃ．４．２．２．２）工程菌ＣＧＭＣＣ Ｎｏ．２１４３。还提供了ＣＧＭＣＣ Ｎｏ．２１４３为发酵菌株生产碱性果胶酶的方法。该基因工程菌目标蛋白胞外分泌且胞外蛋白种类少，简化了微生物生产碱性果胶酶的提纯工艺，降低了生产成本，缩短了发酵时间，提高了生产效率，为产碱性果胶酶微生物发酵法工业化奠定了基础。
果胶酶制剂：属于酶制剂生产方法，为水解酶类范围．以性能稳定、较高活力的１．１３０黑曲为菌株，麦麸固体培养２４－３０小时，以１：５加入１％食盐水提制．是本制剂解决的技术问题．液体酶制剂活力高，可达２００００ｕ／ｍｌ，用量少，一般０．５－１％．安全卫生，无毒性．用于加工果汁、蔬菜汁、果酒，可提高出计率和加速澄清．
颗粒状果胶酶制剂及其制造方法：一种以Ａｓｐ. ｎｉｇｅｒ Ｐ－５６５菌株为生产菌种，以山楂渣为诱导物，经制种，发酵，提取，制粒等工序制取颗粒状果胶酶的方法，具有菌种活力高，诱导物果胶含量稳定、质量高，提纯浓缩工艺科学合理，收率高，制粒包衣工序采用一步沸腾造粒机制粒收率高达９０％以上。用本发明方法制得的颗粒状果胶酶活力高达３０×１０↑［４］Ｍｏｕ／ｇ以上，同时本品还具有重金属含量低，酶活性保存期长，细菌含量低，不易吸潮变质，便于使用和贮运等特点。
枯草芽孢杆菌及固体碱性果胶酶生产工艺：一种枯草芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ Ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＣＧＭＣＣ Ｎｏ．０２１３以及用该菌，在高培养基浓度、适当碳、氮比条件下培养、发酵然后高温快速喷雾干燥，生产一种不含纤维素酶，以果胶酶为主，同时含有蛋白酶、淀粉酶、木聚糖酶的复合固体酶工艺。工艺简单，周期短，原料廉价、酶活性高，菌和酶无毒性，耐热、耐碱，不加防腐剂便可贮藏，且活性稳定，运输，使用皆方便，酶作用条件温和，可重复使用，废水无污染，用于苎麻脱胶回收率高，麻纤维结实，可节省４－５道工序，耗能低。
超果胶酶及其生产工艺：一种果蔬汁、葡萄酒原料汁澄清剂及其生产工艺。超果胶酶系从海藻中提取，也可利用海藻加工厂所排放的下脚料液，即综合得用又治理污染。生产超果胶酶，投资小、工艺简单、利润高。果汁厂、葡萄酒厂使用超果胶酶，澄清时间在３０分钟以下。综合澄清费用为负值。分离出的杂质可手握成团。原料汁中的果胶、蛋白质、果肉微粒、色素等杂质同时彻底提取，产品后期加工所用过滤设备、过滤介质、下胶材料大幅度节省，产品生产周期缩短、产品质量改善。
炭黑曲霉突变株Ｋ５８固体发酵生产果胶酶：属生物技术领域。系用炭黑曲霉突变株Ｋ５８，以麦麸、甜菜渣粉为主要原料进行固体发酵后，用３５－３８℃温水浸提，分离去渣澄清，用中空纤维超滤器浓缩，检测至果胶酶活力达到使用要求即分装为成品。Ｋ５８菌株的形态结构和培养特征及其培养基配方均较独特，产酶活力高，使用效果好。其产品为酸性果胶酶，适合于各种果汁、果酒加工中的脱胶、澄清使用。
果胶酶制剂的生产方法，按以下步骤进行：（１）黑曲霉菌种选育及扩种培养。（２）发酵培养基原料配制，（３）按发酵培养基原料量１－２％的比例接入黑曲霉菌种并使之混合伴匀，（４）调节ｐＨ值为３．９－４．５并置于摄氏温度为２５。Ｃ－３５。Ｃ的条件下发酵７２－８４小时，５）加水浸泡并经粉碎使发酵培养基原料成浆液，（６）浆液先经离心分离去渣，后再经精密过滤除大分子杂质，（７）将精滤后的浆液通过膜滤去除小分子杂质，制取果胶酶浓缩液。用该方法制得的产品成本较低。
固态发酵果渣、菜渣制备果胶酶：一种制备果胶酶的方法，属于微生物发酵领域。发明以水果加工过程产生的废渣或甜菜糖生产过程中产生的废渣作为碳源，以无机氮作为氮源，接种黑曲霉ＰＥ１６５０，（菌种保存中心命名登记号：Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ Ｃ ＧＭＣＣ０４５５），于３１－３３℃、接触空气条件下，固态发酵６０－７２小时达到产酶高峰。发酵后熟物经自来水浸提，即获得果胶酶溶液。经果胶脱胶试验法测定酶活力，果胶酶产率（酶单位数／克原料）最高达到１５９６单位／克原料；提取酶后的残渣含１６．７％的蛋白质。
一种碱性果胶酶制剂的复配和应用方法：涉及棉纺织物的精练处理和所用的一种生物酶纺织助剂。本发明是采用短小芽孢杆菌ＣＣＴＣＣＮＯ：Ｍ２０３０４２作出发菌株，经液体深层发酵制备的碱性果胶酶，进行复配而制备的一种碱性果胶酶制剂，并提供了该复配酶制剂用于棉针织物浸渍精练或棉机织物汽蒸精练的工艺条件。本制剂可替代传统的碱煮精练工艺，可降低生产成本，改善生态环境和提高产品质量。
一种果胶酶亲和吸附剂的制备方法：一种以果胶质含量较高的生物质为原料用表氯醇交联制备果胶酶亲和吸附剂的方法，属于生物化工领域。发明以甜菜废渣、葵花盘、水果渣等果胶质含量较高的生物质作为配基和载体，去甲酯后用表氯醇交联，制得果胶酶亲和吸附剂。用该方法制备的果胶酶亲和吸附剂对不同微生物发酵所得果胶酶粗酶液进行亲和层析，都有较高的纯化效率。
草酸青霉固态发酵生产果胶酶：一种以含果胶质的废弃生物质和无机氮源为原料用草酸青霉固态发酵制备果胶酶的方法，属于微生物发酵领域。发明以甜菜废渣作为碳源，以硫酸氨作为氮源，接种草酸青霉ＢＺＨ－２００２菌株，在接触空气条件下，于温度３０℃左右，环境相对湿度７０％左右固态发酵，培养７２小时左右达到产酶高峰。用水浸提培养物，过滤，滤液即果胶酶液。经脱胶法测定酶活力，果胶酶产率达到１．２×１０＃＋［５］单位／克甜菜渣。（酶活力单位定义为：在ｐＨ４．８，温度４０℃条件下半小时内使１ｍｇ果胶完全脱胶所需的酶量为一个酶活力单位。）
一株嗜碱细菌及其固态发酵生产碱性果胶酶 ：一株高产碱性果胶酶的吉氏芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｇｉｂｓｏｎｉｉ）Ｓ－２菌株，并提供了一种利用该菌株固态发酵制备果胶酶的方法。属于生物工程技术领域。发明以含果胶质的废弃生物质为碳源和诱导物，添加适当氮源、磷酸盐、碳酸钠和水分，接种吉氏芽孢杆菌Ｓ－２菌株，在接触空气条件下，于温度３５℃左右，静态培养７２小时左右达到产酶高峰。用水浸提培养物，过滤，滤液即碱性果胶酶液，超滤浓缩得到浓缩酶液或喷雾干燥得到碱性果胶酶干粉。经ＤＮＳ法测定酶活力，果胶酶产率达到３５００单位／克甜菜渣。（酶活力单位定义为：在ｐＨ１０．５，温度５５℃条件下每分钟产生１μｍｏｌ半乳糖醛酸所需的酶量为一个酶活力单位。）。
高活性液体食品级果胶酶的制造方法：该方法以ＨＢ－００６为出发菌株，经紫外线、亚硝基胍、６０ＣＯｒ射线、ＤＥＳ等诱变剂复合诱变和微波诱变处理，定向筛选，选育出高产果胶酶菌株ＹＳ－４３５；并对传统工艺进行了改进，以二级发酵菌丝体接种代替孢子悬浮液直接接种和采用稀醪发酵，适时限量补料，控制ｐＨ值的办法，提高发酵单位２０％，缩短发酵周期３４小时；并把二滤除菌技术应用于食品级果胶酶生产，开发出食品级果胶酶产品，形成一套完整的果胶酶生产工艺技术。
一种双水相萃取体系分离纯化果胶酶的方法：首先将聚乙二醇、硫酸铵和水混合制成混合溶液，然后将混合溶液振荡摇匀，静置分相后再加入果胶酶液，振荡摇匀，在室温下萃取分相，分离上相液聚乙二醇备用；将分离的上相液聚乙二醇、酒石酸钾钠和水混合，在室温下进行反萃取，果胶酶大部分集中在下相水相中，将下相分离出，采用膜过滤，过滤出果胶酶。本发明采用的双水相试剂中的聚乙二醇对目标物质的生物活性具有保持和稳定作用，同时硫酸铵在水溶液中对蛋白质的生物活性具有保护作用，与反萃取等其他生物分离技术集成，将优化果胶酶的制备工艺，缩短操作周期，提高产品的收率。
利用果胶酶制取柑橘皮低甲氧基果胶的方法：它是将柑橘干皮粉碎成颗粒状，经吸水软化、灭酶、冷凝回流，再离心、甩干处理，得柑橘皮粉，柑橘皮粉经果胶酶水解后离心分离得果胶提取液，果胶提取液经脱色抽滤得果胶滤液，果胶滤液经浓盐酸脱酯转化及沉淀，再抽滤、洗涤、抽滤得到滤饼；将滤饼打散并干燥，得低甲氧基果胶产品。本方法制取柑橘皮低甲氧基果胶，提取率高，能耗低、污染低，提取操作简单、生产效率高且产品质量好。
提高蛋白酶和果胶酶活力的麦芽制备方法：啤酒生产过程中提高原料大麦麦芽的浸出率、糖化力（ＷＫ）和麦汁α－氨基氮是提高啤酒原料利用率的关键问题。本发明大麦制麦过程中提高果胶酶和蛋白酶等关键酶活力的方法，提高麦芽成品的浸出率、糖化力（ＷＫ）和麦汁α－氨基氮，提高啤酒生产的原料利用率。其方法适合各种大麦，尤其适合按传统工艺皮厚、麦芽浸出率低的东北产大麦。
一株克劳氏芽孢杆菌突变株及其发酵生产碱性果胶酶：一株高产碱性果胶酶的克劳氏芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｌａｕｓｉｉ）Ｎ－１０突变株，并提供了一种利用该菌株发酵制备碱性果胶酶的方法。属于生物工程技术领域。发明以甜菜粕为碳源和诱导物，棉粕为氮源，添加适当麦芽糖、磷酸盐、碳酸钠和水分，接种克劳氏芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｌａｕｓｉｉ）Ｎ－１０菌株，在接触空气条件下，于温度４０℃左右，静态培养７２小时左右达到产酶高峰。用Ｎａ↓［２］ＣＯ↓［３］／ＮａＨＣＯ↓［３］缓冲溶液浸提培养物，过滤，滤液即碱性果胶酶液，超滤浓缩得到浓缩酶液或喷雾干燥得到碱性果胶酶干粉。经ＤＮＳ法测定酶活力，碱性果胶酶产率达到３３００单位／克干底物。（酶活力单位定义为：在ｐＨ１０，温度５５℃条件下每分钟降解聚半乳糖醛酸钠产生１μ ｍｏｌ半乳糖醛酸所需的酶量为一个酶活力单位。）
动物源草酸青霉发酵产饲料级果胶酶工艺：一种以鹅体内分离所得到的草酸青霉发酵产饲料级果胶酶工艺，属于微生物发酵领域。通过固态发酵，生产出酶活力大，保存期长，耐贮性好，各组分百分含量稳定和纯度高的酶制剂。生产的果胶酶制剂总酶活力达１０１２３．２２Ｕ.ｇ↑［－１］；聚半乳糖醛酸酶活力５１０１．２３Ｕ.ｇ↑［－１］，为总酶活力的５０％；果胶酯酶活力６９８６．５２Ｕ.ｇ↑［－１］，为总酶活力的６９％；果胶裂解酶０．５６Ｕ.ｇ↑［－１］，为总酶活力的０．００５％。将果胶酶制剂在动物日粮添加０．２％时，粗纤维（ＣＦ）的消化率提高了１７．０４％，中性洗涤纤维（ＮＤＦ）提高了１２．１５％，酸性洗涤纤维（ＡＤＦ）提高了１３．９５％；净蛋白利用率（ＮＰＵ）提高了９．５３％；Ｃａ、Ｐ的表观消化率分别比对照组提高了７．０４％和８．３８％；该工艺解决了生产中复合菌发酵饲料用酶制剂其酶组分及含量不确定的关键生产技术问题，为果胶酶不同组分酶制剂的合理配伍及应用提供了新技术。
蜡状芽孢杆菌菌株的筛选及其碱性果胶酶的制备：一株蜡状芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓ）菌株，其１６Ｓ ｒＲＮＡ基因具有序列表（１）列明的ＲＮＡ序列，并且公开了这一菌株的筛选方法；本发明还公开了一种碱性果胶酶及其制备方法，以上述蜡状芽孢杆菌为出发菌株，进行种子培养和液体深层发酵，最终制得高酶活的碱性果胶酶，并对其部分酶学性质进行了分析。本发明所述的碱性果胶酶活性较高，并且成本低廉、发酵周期短，发酵工艺简便。所制得的碱性果胶酶可用于麻类脱胶和棉织物的精练工艺中，提高产品品质，降低环境污染。
一种产果胶酶的工程菌株：它涉及一种产酶工程菌株。本发明提供了一种用于微生物发酵的产果胶酶的工程菌株。产果胶酶的工程菌株大肠埃希氏菌ＨＤＤＭＧ０５属于埃希氏菌属，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为ＣＣＴＣＣ Ｎｏ：Ｍ ２０８０８２；大肠埃希氏菌ＨＤＤＭＧ０５为革兰氏阴性菌，无芽孢，菌株个体呈短杆状，长为０．２～０．７μｍ，宽为０．２～０．５μｍ；大肠埃希氏菌ＨＤＤＭＧ０５菌落呈圆形，白色，隆起，边缘呈波浪状，表面光滑有光泽，透明，菌落挑起软。可采用ＬＢ液体培养基发酵本发明大肠埃希氏菌ＨＤＤＭＧ０５，其发酵条件与ＬＢ液体培养基培养大肠杆菌的相同；发酵液中大肠埃希氏菌ＨＤＤＭＧ０５菌数浓度为１×１０↑［７］～１×１０↑［８］ｃｆｕ／ｍＬ时发酵液中果胶酶的酶活力达８２００Ｕ／ｍＬ以上。
一株吉氏芽孢杆菌突变株及其发酵生产碱性果胶酶：一株高产碱性果胶酶的吉氏芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｇｉｂｓｏｎｉｉ）２２４９突变株，并提供了一种利用该菌株发酵制备碱性果胶酶的方法。属于生物工程技术领域。发明以甜菜粕为碳源和诱导物，酵母膏为氮源，添加适当磷酸盐、碳酸钠和水分，接种吉氏芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｇｉｂｓｏｎｉｉ）２２４９菌株，在接触空气条件下，于温度３５℃左右，静态培养７２小时左右达到产酶高峰。用Ｎａ↓［２］ＣＯ↓［３］／ＮａＨＣＯ↓［３］缓冲溶液浸提培养物，过滤，滤液即碱性果胶酶液，超滤浓缩得到浓缩酶液或喷雾干燥得到碱性果胶酶干粉。经ＤＮＳ法测定酶活力，碱性果胶酶产率达到６．０５×１０↑［３］单位／克干底物。（酶活力单位定义为：在ｐＨ１０，温度５５℃条件下每分钟降解聚半乳糖醛酸钠产生１μｍｏｌ半乳糖醛酸所需的酶量为一个酶活力单位。）
果胶酶的工业化生产方法，它包括菌株选育、菌种培养、摇瓶发酵、酶液制备，其特征是通过自然采集菌样分离筛选、细胞水平下菌种诱变获得，即蜡样芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓｃｅｒｅｕｓ）、实验室编号为ＭＡＰＬＥ２１，保藏号：ＣＣＴＣＣ ＮＯ：Ｍ ２０９１４７，其生物学特性为：菌体呈杆状，染色均匀，Ｇ↑［＋］、兼性需氧，形成芽胞，芽胞不突出菌体，菌体两端较平整，多数呈链状排列，本方法具有酶活力高，成本低，发酵周期短等特点；用于韧皮纤维脱胶时，脱胶时间短（２－４小时）且稳定，残胶率１．５％以下，对纤维强度破坏小，纤维分散率１００％，制成率达６５％以上，脱胶废水产生量降低８０％以上。
一株高产原果胶酶的菌株及一种发酵提取果胶的方法：一株高产原果胶酶的黑曲霉菌株及采用该菌株发酵提取果胶的方法。所述黑曲霉Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ ＣＤ－０１从湖南常德一倾倒腐烂柑桔的土壤中筛选到，保藏编号为ＣＣＴＣＣ ＮＯ：Ｍ ２０９０３６。本发明发酵提取果胶的方法包括斜面培养、发酵、果胶提取等步骤，所得产品分子量大、胶凝度高、质量稳定，各项指标符合果胶标准，在生产成本方面优于其他果胶提取方法，且在果胶产率方面与以往微生物发酵提取法相比有较大提高。
从木霉复合酶中分离浓缩果胶酶和纤维素酶的方法：用一种简易的方法，可以从木霉发酵产生的酶系中有效的将果胶酶和纤维素酶分开，而且产率非常高。本发明提供的从木霉复合酶中分离浓缩果胶酶和纤维素酶的方法，包括：将木霉进行发酵制成发酵粗酶液和用含三价铁离子的盐将果胶酶和纤维素酶分开的工序。
碱性果胶酶基因工程菌及其构建方法：包括从产碱性果胶酶的菌株中分离染色体ＤＮＡ、设计引物、ＰＣＲ获得目的基因、构建重组质粒、在枯草芽孢杆菌中进行表达，基因序列测定及对比分析。本方法中所得到并表达的基因区别于已报道的该酶基因序列，并在个别氨基酸组成上有差异；工程菌发酵采用的培养基适用于工业化生产，表达宿主为蛋白酶缺陷型，利于后期酶的分离纯化和稳定保藏，工程菌发酵液酶活性较出发菌株提高２２倍，达到３３０Ｕ／ｍＬ。
一种用添加山梨醇提高发酵生产碱性果胶酶产量的方法：涉及碳源添加策略在发酵过程优化中的应用技术领域。本发明用重组毕赤酵母ＧＳ１１５为发酵菌株，在发酵诱导期以恒速或加速添加山梨醇到发酵液中，以提高细胞活力，减弱甲醇的毒害作用，进而提高碱性果胶酶的产量。较低的山梨醇添加量不仅不会抑制甲醇对菌体的产酶效果，还可以从一定程度上削弱菌体受到的甲醇毒害作用，从而进一步提高产酶效率。当山梨醇采用变速流加（０．９ｇ／ｈ－７．２ｇ／ｈ）时，酶活从对照的９３０Ｕ／ｍｌ提高到１５４１Ｕ／ｍｌ。本工艺简单有效，而且可应用于今后果胶酶的工业化生产中，且对其它的毕赤酵母发酵过程优化具有一定的指导意义。
一种纯棉机织物果胶酶、双氧水温堆前处理工艺：其包括下列内容：ａ．轧酶氧工作液，投入织物堆置；浸轧完成后充分热洗；ｂ．碱氧一浴煮漂；ｃ．充分热洗后烘干。应用本发明的工艺进行纯棉机织物前处理，纯棉机织物毛效１０－１１ｃｍ，白度７８－８１度，退浆率９２％以上；并可减少工艺流程，提高生产效率，降低能耗。
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