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长春花提取长春碱及长春花属生物碱脂质体的制备方法

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长春花提取长春碱:长春花又称日日新或雁来红,夹竹桃科植物长春花的全株。为常绿亚灌木,高约80厘米,生于林边、路旁、海滩及园地草丛中,长江以南各地多有栽种。长春花可以分离出70多种生物碱,其中经医学证明有6种具有抗癌功能。各部位含总生物碱量:叶0.37%-1.16%、茎0.46%、根0.7%-2.4%、花0.14%-0.84%、果皮1.14%及种子0.18%。长春碱为针状结晶,熔点211-216℃。溶于醇、丙酮、醋酸乙酯和氯仿,几乎不溶于水和石油醚。长春碱(C46H58N400)具有良好的抗癌、降血压的作用。


从长春花中提取长春碱类提取物的方法,包括如下过程:(1) 长春花经酸性水拌湿后搅碎,然后用酸性水浸泡,过滤后滤液用碱调节至碱性,用氯仿萃取碱水相,收集氯仿相,回收氯仿后得固体回收物;(2)回收物用酸性水溶解,加乙酸乙酯萃取,回收酸性水相;(3) 将步骤(2)中回收的酸性水相调节至碱性,用氯仿萃取,萃取相回收氯仿得粗制生物碱;(4)将步骤(3)中获得的粗制生物碱用酸性水溶解,调pH至碱性,离心收集下层沉淀,沉淀物经干燥后得精制长春花生碱,经氧化铝柱层析分离得长春碱、长春新碱;(5)将步骤 (4)中离心所得滤液,用氯仿萃取,减压浓缩,以大孔树脂分离得长春质碱、文朵灵。这种方法可以提高长春花的利用率。


一种生产长春花生物碱的方法。该方法,包括下述步骤:1)将长春花的外殖体进行脱分化培养得到长春花愈伤组织并经过继代培养获得疏松快速生长的细胞系;2)将步骤1)所获得的长春花愈伤组织细胞系在添加秋水仙碱的基本培养基中诱导培养得到多倍体细胞系,然后进行扩增培养获得大量长春花多倍体细胞; 3)将步骤2)得到的长春花多倍体细胞接种于合成培养基中培养得到富含长春花次生代谢产物的细胞。本发明的方法用长春花细胞培养生产长春质碱,可稳定的实现长春质碱的工业化生产,并且其生产成本较低,培养周期短,不受自然环境以及气候的影响,可以实现周年生产。


一种长春花生物碱生产原料的加工方法,它是将鲜长春花置于湿度为 60%~90%,鼓风温度为23℃~53℃的流动空气条件下处理1~8小时后改变条件,将原料放入密封的储料罐中在浓度为5%~35%,温度为15℃~ 30℃的PEG(聚乙二醇)6000溶液中,胁迫处理5~20小时,洗去PEG溶液后加入纯水,经205-405nm波长紫外光的照射,在1~3小时内每隔30 分钟进行一次间歇照射,照射时间为3~5分钟,照射剂量为4~10W/m2,得到长春花生物碱的生产原料。采用本发明加工后的长春花生物碱的生产原料中长春碱含量跃增3~10倍,同时,长春新碱含量也有提高。


一种从长春花鲜草中提取生物碱的工艺,其特征在于该工艺包括下列方法:(1)将鲜长春花先经打浆,并调酸至pH2-3;(2)匀浆调酸后,搅拌浸泡后,抽入离心机,渣再经轧辊机将余汁榨尽;(3)稀汁水经粗滤、精滤,最后进膜过滤系统,得到浓汁水;(4)浓汁水调pH6.7(± 0.1)后,静置取清液压入逆向萃取柱,经四氯化碳萃取,取萃取液减压浓缩,加少量丙酮抽松得粗碱。本发明与传统工艺相比,能根据植物生理代谢不同时段,按人为设定的要求提取有效成分最大化技术;对所有从天然植物中提取有效成分,具有普适而广泛的可供借鉴的通用技术;本工艺极具产业价值。


一类长春花属生物碱,属于具有药用价值的生物碱及其衍生物,通过对6’-N氧化-环氧长春碱进行结构修饰得到,解决现有长春花属生物碱存在的抗肿瘤活性较低、神经毒副作用较高的问题。本发明将6’-N 氧化—环氧长春碱的3位点进行半合成修饰后得到,还可以进一步将6’ -N氧化—环氧长春碱的4位点进行半合成修饰,用于抗肿瘤药物。通过癌细胞系的半致死量(IC50)实验和小鼠动物实验,证明本发明的这类化合物都具有较好的抗肿瘤活性和较低的神经毒性,对于发展抗肿瘤新药具有重要意义。


一种分离中药总生物碱的方法,尤其是一种从中药长春花提取液中分离总生物碱的方法,属中药领域。该方法包括如下技术方案:取长春花提取液,调整pH值1至7,滤过,取滤液加于阳离子交换树脂柱上,先以水洗脱除杂,再用0.5%~15%酸液洗脱,检查无生物碱为止,收集洗脱液,加碱中和,经脱盐处理,浓缩干燥得长春花总生物碱。该方法克服了现有技术提取率低、有机溶剂用量大、工艺复杂、无法大生产等不足,可以高效率地从长春花提取液中分离高纯度的长春花总生物碱。


长春花属生物碱脂质体及其制备方法:该脂质体由以下重量配比的原料及辅料组成:长春花属生物碱1-10份,带电荷磷脂0.1-1000份,不带电荷磷脂 0.1-1000份,胆固醇0-900份,冻干赋形剂1-2000份。本发明的优点是不加任何表面活性剂、酸、碱、盐、聚合物和抗氧化剂,也不采用pH梯度或离子梯度法,直接利用带电荷磷脂使长春花属生物碱脂质体的包封率达到90%以上,脂质体的稳定性好,粒径小,并能提高临床使用的安全性和疗效。该制备方法切实可行,适用于工业化生产。

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