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紫杉醇/紫杉醇半合成工艺/紫杉醇脂质组合物/紫杉醇抗癌药物

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水溶性紫杉醇衍生物:涉及一类含有硫代硫酸或其盐的水溶性紫杉醇衍生物,该衍生物可用于肿瘤和癌症的治疗。与现有的药用单一紫杉醇比较,具有保持原有疗效,降低毒副作用,生物利用度高的优点。

臭氧处理制备高纯度紫杉醇的方法:它以紫杉醇粗产品为原料,可采用臭氧直接处理和后臭氧处理两种方式。直接方式是将臭氧直接通入溶有紫杉醇原料的溶液,然后经过中压快速分离制备色谱柱,经淋洗处理,分离得到99.4~99.9%的紫杉醇。后臭氧方式是将紫杉醇粗产物经层析硅胶填充柱用淋洗液预处理后,再用臭氧处理,经过中压快速分离制备色谱柱,经淋洗处理,分离得到99.5~99.9%的紫杉醇。该方法工艺简单,容易分离掉紫杉醇的伴生物,适用于较大规模的工业化生产。

紫杉醇半合成工艺:针对现有技术的缺点,寻找和分离到一种在红豆杉植物中含量高于已有紫杉醇前体的化合物7-(1β-Xylosyl)-10-deacetyltaxol,通过本发明的半合成工艺将该化合物转换为有高度利用价值和广泛应用前景的10-Deacetylbaccatin Ⅲ,使得红豆杉资源的利用得以更好地发挥。提高了紫杉醇资源的利用率。

紫杉醇新式半合成工艺:提供一种以在红豆杉植物中含量较高的化合物9-Dihydro-10deacetylbaccat inⅢ为前体的紫杉醇半合成工艺。即寻找和分离到一种在红豆杉植物中含量高于已有紫杉醇前体的化合物,通过本发明的半合成工艺将该化合物转换为有高度利用价值和广泛应用前景的10-DeacetylbaccatinⅢ,使得红豆杉资源的利用得以更好地发挥。提高了紫杉醇资源的利用率。

含有紫杉醇的抗癌药物:其组份含有紫杉醇0.2%—18%(重量单位,下同),抗过敏反应及毒性的辅药0—70%,添加剂为0—95.5%,提高人体免疫功能的辅料为0—50%,其中抗过敏及毒性的辅料及添加剂不同时为零,药物剂型为片剂或胶囊。它解决了含有紫杉醇注射液的抗癌药物使用条件苛刻、价格昂贵的问题,提高药效,减少毒副作用,价格便宜,易于生产、人体服用和携带方便。

清洁纯化紫杉醇的方法:是一种纯化紫杉醇粗产物,清洁制备精产品的方法。该方法使用填充色谱柱,常压下经梯度淋洗含10~48%紫杉醇的粗产品,以50~300目硅胶填充制备的色谱柱,用无毒性的正构烷烃(正戊烷~正辛烷)、乙酸酯(乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯)为淋洗剂,常压下分离纯化紫杉醇。淋洗后的溶液经旋转蒸发回收溶剂,溶液浓缩后的分段产物经真空冷冻干燥,获得99.5%~99.9%的紫杉醇。该方法工艺简单,成本低,纯化过程无污染,溶剂、淋洗剂可以回收,便于工业化生产。

制备紫杉醇的新方法:以红豆杉科榧属植物(Torreya)的假种皮为原料,经乙醇提取、硅胶柱层析、高效液相色谱柱分离可得到紫杉醇。本原料紫杉醇的含量是现用原料红豆杉科红豆杉属植物叶和树皮含量的2倍,且利用的是加工种子后的废弃物假种皮,因而不会破坏植物资源。本发明降低了制备紫杉醇的成本,扩大了其原料的来源,且保护了植物资源。

用于回收紫杉醇的树脂流化装置与技术:该装置特征在于过程中设有一分离槽,分离槽与树脂交换柱形成环流通道,在该通道内,树脂在气、液作用下处于流化状态,料液在环流通道内呈外循环流动,从而和树脂充分接触交换。交换柱内装填强型阴离子树脂或阴、阳离子混合树脂,并使所处理料液呈酸性。本发明有效地提高了料液中紫杉醇的含量,可大大提高紫杉醇的回收率。本发明操作简单,易于工业化,具有良好的经济效益性和社会效益性。

紫杉醇酒制造方法:该酒是以紫杉的茎枝为原料配以西洋参、枸杞、蜂蜜、冰糖、纯粮白酒经加工制成。该酒具有清热生津,预防感冒、抗癌等效果。

水溶性化合物—聚氨基酸紫杉醇酯制备方法:所述的化合物可用于肿瘤和癌症的治疗;与现有的紫杉醇针剂比较,提高了疗效、降低了毒副作用、减轻了患者的痛苦。同时、由于人体内对新型紫杉醇化合物—聚氨基酸紫杉醇酯的缓慢分解,使本发明的水溶性化合物—聚氨基酸紫杉醇酯具有缓释作用,所以增加了紫杉醇的疗效及生物利用度。

从紫杉属植物的细胞培养物高纯度高收率地大量生产紫杉醇的方法:从紫杉植物大量生产紫杉醇的方法包括的步骤有:(i)对紫杉属植物的生物体进行有机溶剂萃取得到一种粗萃取物;(ii)将该粗萃取物用合成吸附剂处理并过滤得到滤液;(iii)向滤液中加入己烷以沉淀出粗紫杉醇;(iv)将粗紫杉醇在一种醇和水的混合物中进行分步沉淀,并干燥沉淀物以得到紫杉醇粉末;以及(v)将紫杉醇粉末进行高效液相色谱分离。按照本发明的方法,可以简单地从紫杉属植物得到纯度大于99%的紫杉醇并且收率高于90%。

以高产率通过半连续培养紫杉属植物而大量生产紫杉醇的方法:通过采用紫杉属植物细胞的半连续培养可以高产率制备紫杉醇,所述的方法包括(i)将紫杉属植物细胞接种到含1—10%(重量/体积)糖的培养基中并保温培养;以及,(ii)将1/10—1/2体积的步骤(i)得到的培养物转移到新鲜培养基中并重复步骤(i),向剩余的培养物中加入1—10%(重量/ 体积)糖并培养至紫杉醇最大产量时间。

提高红豆杉细胞中紫杉醇含量与释放方法:该方法是将红豆杉细胞接种在B#-[5]培养基中,在细胞生产处于对数期阶段,加入稀土化合物诱导子,可提高细胞中紫杉醇含量达2.5~6倍,释放量达1.2~5倍。本发明所采用的稀土化合物诱导子,原料易得价廉,操作运行过程可靠,不产生三废污染。

从西藏红豆杉提取紫杉醇的方法:特别是提取紫杉醇粗产品的方法,它包括:原料粉碎、渗浸、减压浓缩、提取,其中,经减压浓缩得到的深绿色浸膏经水稀释后,以石灰水调pH值7.5—8.0,沉淀过滤,滤液以溶剂提取,减压浓缩干燥得到含紫杉醇干膏(粗品)。本方法以简单沉淀去除杂质80%,而紫杉醇及相关成分不受影响,提高过柱前被分离成分的含量和过柱质量,减少过柱次数,粗产品中紫杉醇含量高。

紫杉醇酒及生产方法:为一种保健酒及其生产方法。现有含紫杉醇的酒有毒性反应,酒液易变混浊。本发明产品含粮食基酒,红豆杉中的紫杉醇,以及何首乌、枸杞和甘草中的药用有效成分。分别将红豆杉树皮和根,何首乌、枸杞和甘草用高度酒浸泡蒸馏后得提取液;将提取液加入到38—52度的粮食基酒中调配即得本发明产品。毒理安全性试验结果:对人体无毒。酒液长期保存无沉淀。该酒防癌抗癌,增强人体免疫功能的效果优于同类药酒。

提高紫杉属植物针叶中紫杉醇含量的方法:该方法是将有效量的甲醇、可为紫杉属植物吸收的无机物、有机化合物及水所组成的活性化合物喷洒在紫杉属植物上。按照本发明的方法,紫杉属植物针叶中紫杉醇的含量比原来提高6%以上。

从红豆杉细胞中生产紫杉醇的工艺:采用红豆杉科植物进行愈伤组织和细胞悬浮培养,继而进行细胞大规模培养,特征是在B5培养基中附加激素2,4—D和KT条件下进行红豆杉单细胞克隆培养,获取紫杉醇含量达0.2%以上的细胞系分离纯化紫杉醇。解决了从植物树皮中生产紫杉醇工艺的资源奇缺、含量极低、污染环境、提取分离困难的缺点;与已有细胞培养生产紫杉醇工艺相比,具有易操作、降低成本、提高了目的次级产物的含量的优点。

从美丽红豆杉茎叶中提取紫杉醇的方法:采用混合溶剂浸出、浓缩、溶剂提取、硅胶柱层析后获粗产品,再经重结晶纯化和柱层析分离可获 ≥98%纯度的紫杉醇,得率十万分之七左右。本发明方法可选用资源丰富的浙江红豆杉茎叶为原料。本方法不仅简易、且产物纯度和得率高,资源丰富,适于规模生产。

细胞培养生产紫杉醇的方法:利用从中国的五种红豆杉愈伤组织系中筛选出来的细胞株,采用两步法培养,细胞生物合成法生产抗癌新药紫杉醇的方法。把来自中国的五种红豆杉的细胞株分别作为种细胞,接入生长培养基悬浮培养,培养一段时间后,再转入生产培养基继续培养,然后从获得的细胞培养中将紫杉醇分离提纯。应用此法不仅从根本上解决了紫杉醇药源受到自然资源限制的问题,而且能进行工业化生产,大大缩短生产周期,降低生产成本。

生物催化手性合成紫杉醇侧链和半合成紫杉醇的新方法:首先采用动物肝丙酮粉催化方法拆分消旋体反式-2-苯基环己醇的乙酯,得到的(-)-反式-2- 苯基环己醇作为β-内酰胺型侧链的关键中间体。(-)-反式-2-苯基环己醇与巴豆酰氯反应,经臭氧解、NaBH#-[4]还原,三异丙基硅氯保护,得到手性辅剂甘醇酸酯。该手性辅剂再与三甲基硅亚胺反应、乙基乙烯基醚处理,将乙酰氧基置换为乙氧乙基,制得侧链前体即顺-1-苯基-3-(1-乙氧乙基)-4-苯基氮杂环丁酮。母核10-脱乙酰巴卡亭III的 C-13羟基作醇锂盐处理,醇锂与β-内酰胺侧链前体反应具有一定的立体选择性。该侧链前体直接与金属醇盐10-dab反应,缩合成为紫杉醇。

利用柱溴化法制备高纯度紫杉醇的工艺:对于含三尖杉宁碱的红豆杉粗提物,用溴与三尖杉宁碱进行加成反应,随后经过正相填充色谱柱分离除去二溴化三尖杉宁碱及其伴生物,再经过二次重结晶制备高纯度紫杉醇,总得率高于85%。纯度较低的紫杉醇,转移至常压正相硅胶柱继续分离。本发明工艺简单、生产投资小、成本低廉、得率高,有利于大规模生产。试剂溶剂均可回收循环使用,有利于环境保护。

用可再生资源提取药用紫杉醇及衍生物的方法:其特征在于它是以紫杉树的枝叶或人工种植红豆杉植物的枝叶为原料,经干燥、粉碎、浸出、浓缩浸出液负载在硅藻土后进行正相色谱分离,再在高分子填料柱中进行反相色谱分离,再将粗产品分别经重结晶和反相色谱分离得到药用产品,该方法具有产品纯度高、回收率高、方法可靠的优点及效果。

水溶性抗癌药紫杉醇复合物及制备方法:是在溶液中将四乙烯五胺桥联双环糊精和紫杉醇直接混合制备。四乙烯五胺桥联双环糊精和紫杉醇的复合物中四乙烯五胺桥联双环糊精与所述的紫杉醇复合比为1∶2。本发明水溶性抗癌药紫杉醇复合物可对紫杉醇起到增溶和缓释作用,进而延长药效,并对抗癌药物紫杉醇的临床应用提供了一种新的可行的途径,即为紫杉醇的临床试用提供了新的水溶性缓释复合物。

利用酶催化半合成紫杉醇的方法:属于分子生物工程与生物化学工程领域。紫杉醇的酶催化半合成以红豆杉中含量相对丰富的10去乙酰巴卡亭三为底物,对紫杉醇三环二萜骨架修饰过程中采用酶催化的方法,直接对10位和13位进行特异性酰化,且整个反应在温和条件下进行,紫杉醇酶催化半合成以三个重组酰化酶为催化剂,在反应器中进行三步酰化,从而合成紫杉醇。本发明提供的紫杉醇酶催化半合成方法,对紫杉醇骨架进行修饰,所需步骤更少,操作更简单,提高了紫杉醇合成的选择性和产率,从而在更大规模上进行更大强度的紫杉醇生产。

抗癌药物的新制剂紫杉醇微乳的制备方法及其稳定性和静注、口服生物利用度的测定:蛋黄磷脂(EPC),紫杉醇和PEG- DSPE的氯仿溶液在氮气流下减压成膜,加入经水化超声处理的玉米油,进一步超声处理后,通过高压匀质器使其微乳化。所得微乳粒径50~ 100nm,包封率≥99.2%,免绝对生物利用度:静注107.7%,口服22.4 %。

从红豆杉植物细胞培养液絮凝物中分离纯化紫杉醇的方法:首先用90~99%乙醇或甲醇多次室温浸提絮凝物,乙醇或甲醇的提取物或将其进一步用二氯甲烷萃取所得产物,先后进行常压硅胶柱层析和薄层硅胶低压柱层析,柱层析所得紫杉醇用乙酸乙酯和正已烷或丙酮和正己烷混合溶剂多次重结晶,紫杉醇纯度达98.1%。由于红豆杉植物细胞培养液絮凝物体积相对细胞培养液体积小得多,却富集了细胞培养液中95~100%的紫杉醇,所以,从絮凝物中提取紫杉醇要比从细胞培养液中直接提取紫杉醇节省了大量有机溶剂、简化了分离过程、降低了成本、节省了提取紫杉醇的时间。

抗癌药紫杉醇自乳化固体纳米粒——注射用紫杉醇的制备方法:著名抗癌药紫杉醇静脉注射剂的一种新配方(不含聚氧乙烯蓖麻油,无致敏性),新剂型。以羟丙基倍他环糊精与磷脂为载体,聚维酮为混悬稳定剂的纳米制剂。依超分子化学中胶束、囊泡等分子聚集体的化学、物理特性,以亲水性有机溶剂和水为条件,在加温和减压下制备。制剂为疏松、多孔的无菌颗粒或粉末,加注射用溶剂(注射用水,葡萄糖注射液等)迅速溶解并形成微乳。亚微乳状溶液——纳米微粒混悬液,具靶向性,可用于300mg/1000ml/次3小时输注,三周一次疗法;100mg/250~500ml/ 次输注,一周一次疗法。或大剂量400mg/1000ml/次疗法。安全,药效优于市售紫杉醇注射液。

提高南方红豆杉紫杉醇产率的方法:涉及一种提高紫杉醇产率的方法,以南方红豆杉芽为外植体,去除少部分外鳞后接入添加有2,4-D 0.5-2.0mg/L和/或NAA 0.5-3.0mg/L的改良MS培养基,23-25℃黑暗培养35-40天后,选取疏松、浅绿色或白色的愈伤组织;转入添加有2,4-D 0.5-2.0mg/L、NAA 0.5-3.0mg/L和KT 0.2-1.0mg/L或其中的任意两种的改良B#-[5]培养基,23-25℃黑暗培养35-40天。本方法培养所得愈伤组织的紫杉醇含量可达到0.013%,比以南方红豆杉茎段和叶片为外植体诱导形成的愈伤组织中紫杉醇的含量提高了62.5%。

利用稀土作诱导子提高南方红豆杉细胞培养物中紫杉醇含量的方法:将南方红豆杉细胞按常规方法培养15-18天,然后在培养液中加入稀土元素铽(Tb)或镱(Yb),于23-25℃黑暗振荡继续培养20-25天(振荡条件通常为摇床 120-125r/mm)。所得培养物中紫杉醇总含量分别可达到1.2418mg/L、1.3246mg/L,最高释放率分别为 30.9%、28.3%。本发明方法既能提高细胞干重,又能增加紫杉醇的含量,而且操作方便,适合于工业上应用。所使用的稀土还能诱导细胞积累的紫杉醇分泌至胞外,有利于紫杉醇收集,这对工业化生产具重要价值。

紫杉醇纳米微粒的制备方法:是在紫杉醇的醇溶液中添加0.05-5%的表面活性剂,在高速搅拌和超声震动条件下,将母液滴加到5-500倍纯净水中,并经一定时间存放后即成为纳米紫杉醇悬浮液,经冷冻干燥等方法,即可获得紫杉醇纳米微粒。本发明的方法可靠,操作简便,所需能耗很低,不产生环境污染,所制得的纳米紫杉醇具有更高的生物活性,可以充分发挥紫杉醇的治疗效果。

紫杉醇与聚乳酸可控复合体:紫杉醇与聚乳酸可控复合体是将纯紫杉醇与医用可降解聚乳酸可控复合在一起,物理性质和化学性质均无变化,并可以定量复合,准确度可达人体所需的药量标准。按照1μg紫杉醇与 xμg聚乳酸(x=1.2.3......n)复合在一起,可控制在一定时间内将纯紫杉醇定量缓慢释放出来,而医用聚乳酸则自行降解,被人体利用或经人体代谢排出体外,这样使得纯紫杉醇药物直接作用于细胞、抑制细胞的增生,达到治疗的目的。

采用共沉淀和微流态化两步法制备紫杉醇隐形脂质体:用两亲性聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(PEG-DSPE)修饰脂质体膜。使脂质体的粒径小于100nm,药物包封率≥98%。紫杉醇隐形脂质体在体内可以躲过肝脾网状内皮系统的捕捉吞噬,延长了在血液内循环时间。抗肿瘤作用显示,紫杉醇隐形脂质体较传统紫杉醇脂质体和泰素对肿瘤的抑制作用提高了2 倍,生存率提高了1倍。

紫杉醇半合成新方法:紫杉醇(Paclitaxel,Taxol)是一种由红豆杉属植物的树皮树叶提取的化学结构复杂、作用机制独特的抗肿瘤药物。植物材料含量极低,提取成本过高。紫杉醇分子母核四环双萜10-脱乙酰巴卡亭III(10-dab)很容易从常见植物马尾松或粗榧中提取,也可以从紫杉醇提取过程中的副产品中得到。本发明是以10-dab为起始材料半合成紫杉醇。即采用合成的侧链前体 -顺-1-苯基-3-(1-乙氧乙氧基)-4-苯基氮杂环丁-2-酮与10-脱乙酰巴卡亭III衍生物进行缩合制备紫杉醇。所得紫杉醇与来源于红豆杉是紫杉醇化学结构完全一致。

利用基因工程技术提高紫杉醇含量的方法:提供了紫杉醇生物合成中限速步骤的关键酶之一的紫杉二烯合成酶基因的cDNA 及其在利用基因工程技术提高紫杉醇含量方面的应用。涉及包含所说基因的cDNA的获得及利用基因工程技术提高紫杉烷类化合物如紫杉醇含量的方法。

紫杉醇C-13手性侧链前体的合成方法:即先合成消旋体氮杂环丁酮衍生物,再用脂肪酶将其催化拆分,得到顺-3-乙酰氧基-4-苯基氮杂环丁-2-酮,然后再用它合成侧链前体。C-13侧链前体是半合成抗癌药物紫杉醇的关键中间体,该侧链前体可以直接与10-脱乙酰巴卡亭III衍生物缩合制得紫杉醇。

新方法紫杉醇半合成:紫杉醇(Paclitaxel,Taxol)是一种有效的抗肿瘤药物,此药目前是由红豆杉植物的树皮树叶提取的,但含量极低。紫杉醇分子母核四环双萜 10-脱乙酰巴卡亭III很容易从常见植物马尾松或粗榧中提取,也可以从紫杉醇提取过程中的副产品中得到。本发明是以10-脱乙酰巴卡亭III为起始材料半合成紫杉醇。即采用合成的侧链前体顺-1-苯基-3-(1-乙氧乙氧基) -4-苯基氮杂环丁-2-酮与10-脱乙酰巴卡亭III衍生物进行缩合制备紫杉醇。所得紫杉醇与来源于红豆杉是紫杉醇化学结构完全一致。

通过分批或半连续培养大量生产紫杉醇的方法:以高产率通过分批或者半连续培养紫杉属植物而大量生产紫杉醇的方法,根据本发明,通过采用紫杉属植物细胞的分批或半连续培养可以高产率制备紫杉醇,所述的方法包括(i)将紫杉属植物细胞接种到含1 -15μM AgNO#-[3]的培养基中并培养;以及,(ii)从产生紫杉醇的培养物中回收紫杉醇。

从种植红豆杉叶枝中制备紫杉醇的方法:使用种植生长了2-4年的红豆杉的树叶、树枝,剪除直径小于0.5cm的树枝后粉碎,用乙醇浸泡,过滤后去除废渣,滤液浓缩后用乙酸丁酯和水分散萃取,乙酸丁酯萃取液浓缩、干燥得到紫杉醇粗原料;利用紫杉醇粗原料,经常压正相硅胶柱层析,以乙酸乙酯和环己烷梯度淋洗,分段收集淋洗液,将紫杉醇馏分浓缩后经反相C#-[18]高压液相色谱法分离。得到纯度为99.5%以上的紫杉醇。该方法工艺简单、成本低、试剂溶剂无毒性、不破坏天然资源、有利于生态保护。该方法特别适用于使用种植的红豆杉为原料生产紫杉醇。

从常见榛科植物中提取紫杉醇的技术工艺过程包括:原料筛选制备、1%粗膏制备、纯化精制,其中:1%粗膏制备包括连续易相浸提、浸提液浓缩、浸膏、过滤分离、脱脂液回收、萃取、浓缩;纯化精制包括混合搅拌、柱层析分离、下柱液浓缩、第二次上柱层析及下柱液浓缩、结晶、结晶物纯度<60%柱层析浓缩处理、结晶物纯度>60%柱层析结晶处理、提纯精制;本发明所得纯度≥98.25%的紫杉醇产品,其纯度符合美国FDA制备针剂的要求,其化学性质与从红豆杉树皮中提取的紫杉醇相一致,为人类战胜癌症提供了急需的紫杉醇,又保护了珍稀的红豆杉物种,保护了生态环境。

紫杉醇纳米磁性靶向制剂制备方法:目前的紫杉醇注射液,是将药物溶解在乙醇中加入助溶剂聚氧乙基代蓖麻油制成的一种治疗乳腺癌、卵巢癌的注射液剂型,用药量大、副作用大、治疗效果差。本发明是将抗癌药物紫杉醇溶解在无水乙醇中,加入纳米级超细磁流体充分混合,加入乳化剂制成紫杉醇磁流体乳化液;再将医用高分子单体材料加入乳化剂或用增溶的方法使其高度分散后,加入紫杉醇磁流体乳化液,使高分子单体聚合,同时将抗癌药物紫杉醇和超细磁流体包裹成毫微球或毫微囊或脂质体 (平均粒径50~500NM),按制药的常规工艺制成注射液、片剂、胶囊等剂型;进入体内后,在体外外加磁场的作用下定向移动,定位在肿瘤靶器官病变组织浓集,达到高效治疗的目的,降低了生产成本,利于推广。

联合制备高纯度紫杉醇、三尖杉宁碱,10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ的方法:提供一种从紫杉植物的树叶、树皮或树枝的醇提取物中联合生产高纯紫杉醇、10-脱乙酰基巴卡亭III和三尖杉宁碱的方法,用乙酸丁酯溶解醇提取物后,用碳酸氢钠溶液反萃取去除杂质将有机相减压蒸发除去溶剂,用乙腈溶解残渣,冷冻结晶得到10-脱乙酰基巴卡亭III,以结晶母液作原料,用以高分子填料为固定相的反相色谱法分离,纯化获得三尖杉宁碱和紫杉醇,用冷冻结晶法从反相色谱洗脱液中分离出有效成分,再结合以硅胶为固定相的正相色谱法深度纯化紫杉醇产品,其纯度达99.6%以上。

从红豆杉细胞培养液滤液中富集提取紫杉醇的方法:其技术要点是将大孔吸附树脂与试液充分混合进行吸附富集,或让试液多次通过装有大孔吸附树脂的柱子进行吸附富集,有机溶剂洗脱被树脂吸附的紫杉醇,浓缩可得到高含紫杉醇的浓缩物。本发明简化了工艺、降低了提取分离紫杉醇的成本,简便、高效、易于工业化并可节省大量有机溶剂、减少设备费用、节约能源,避免污染环境。

细胞培养生产紫杉醇的方法:提供了一种运用植物细胞培养手段,从东北红豆杉细胞大规模培养中生产紫杉醇的方法。该方法是在MB培养基上由东北红豆杉愈伤组织中筛选出高产细胞株,接种到1/2MB培养基上进行细胞种子培养和细胞反应器大规模培养。在MB和1/2MB培养基中附加IAA、KT和NAA条件下进行细胞培养。然后对细胞反应器中的细胞培养液进行分离纯化,获取紫杉醇含量达0.9%。纯度98%。解决了紫杉醇生产的原料问题。易操作,生产成本低,不污染环境,达到了产业化水平。

红豆杉细胞培养中细胞生长及紫杉醇合成高峰的监测方法:其技术要点是根据测得的培养液的电导率数值,监测细胞生长和紫杉醇累积的情况。本发明提供了一种简便、快捷监测红豆杉细胞生长及紫杉醇累积情况的方法,可以对培养细胞进行连续自动监测,能及时了解细胞生长状况和产物合成情况,具有节省人力、物力、提高劳动生产率的特点。

从红豆杉植物细胞培养液中初分离紫杉醇方法:其技术要点是培养液中加入絮凝剂,搅拌均匀便迅速絮凝澄清,经过滤后可得到富集紫杉醇的浓缩物。组合的絮凝剂在絮凝澄清、过滤方面优于单一的絮凝剂。经HPLC检测表明,絮凝处理和未经絮凝处理的培养液中紫杉醇含量无明显变化,说明絮凝处理对紫杉醇不产生不利反应。它具有简便、可靠、效率高、成本低的优点,且不产生三废污染。

紫杉醇脂质组合物制备方法:公开了具有良好抗癌作用的紫杉醇脂质体制剂,其毒性小、病人耐受性好、水溶性及稳定性提高、相对成本较低;并公开了该制剂的可工业化实施的方法,用胆固醇及氨基酸作稳定剂,用甘露醇或葡萄糖作冻干保护剂,用异丙醇或乙醇作溶剂。

用靶点微管蛋白纯化紫杉醇混合物中紫杉醇的方法:该方法是利用紫杉醇的药理作用靶点微管蛋白为分离介质,及紫杉醇和微管蛋白两者之间可逆特异性结合作用,将紫杉醇混合物溶解于有机溶剂,微管蛋白混合于缓冲液水相中,然后将上述的有机相液与缓冲液水相相混合,分层后取出水相加入新鲜有机溶剂和解离剂,搅拌、静置,取出有机相经蒸发等后处理得纯度达98.5%的紫杉醇。本发明制备过程简单,产品纯度高。

红豆杉细胞培养中筛选紫杉醇高产细胞株的方法:红豆杉的外植体经诱导得到愈伤组织,进行初步筛选后,利用单细胞克隆方法获得大量克隆细胞,继代扩大培养后进行分析、筛选和稳定性试验,获得生长速率为0.52g (dw)/L.d、紫杉醇含量为0.1%的细胞优株,紫杉醇含量较原植物提高了10倍。本发明具有简便、快捷选取紫杉醇高产细胞株的特点,能节省大量人力、物力、提高劳动生产率。

紫杉醇的多羟基水溶性衍生物制备方法:使用氯甲酸异丁酯作为活化试剂,与2’-O-酰基酸紫杉醇形成混合酸酐,作为氧亲核试剂进攻丙三醇,高活性、高选择性地生成单酯。本发明还使用分析型 HPLC 跟踪反应,使用制备型HPLC分离纯化反应中间体及产物。重现性好、降低了生产成本。同时,缩短了分离时间、提高了可靠性。

复方紫杉醇系列抗癌药物:公开了一种治疗人的肿瘤和癌症的复方紫杉醇系列抗癌药物,其组份包含有紫杉醇、三尖杉磷碱、巴卡亭III0.1~0.3%、10-去乙酰巴卡亭III0.1~0.3%、1 羟基巴卡亭I0.1~0.3%、10-去乙酰-7-差向紫杉醇0.1~0.8%、醋酸、乙醇、碳酸氢钠和糖份(蔗糖或蜂蜜);其剂型有复方紫杉醇抗癌胶囊、复方紫杉醇抗癌片、复方紫杉醇抗癌含片、复方紫杉醇抗癌丸、复方紫杉醇抗癌口服液、复方紫杉醇抗癌栓和复方紫杉醇抗癌酒。

连续分配柱层析分离紫杉醇工艺:采用不倒出层析柱中硅胶,而采用溶剂清洗杂质,溶剂恢复硅胶再生的方法,由1%粗品分离成含量为50%的半成品,再由半成品分离成98%以上成品,均采用连续上样的分配柱层析。对粗品柱流出含紫杉醇混合物的洗脱液,改变人们习惯系统分类的收集方式,而只分两类。对难分离物质三尖杉宁碱采用2%溴氯仿液瞬间穿越柱中混合物样品层,经和柱层原理基本相同的薄层技术检识,顺利得到紫杉醇纯品,含量大于98%。本工艺新颖、简便、快速、节约成本,利于大规模生产。

聚乙二醇支载的紫杉醇或多烯紫杉醇的前药:该紫杉醇或多烯紫杉醇的前药,是利用氨基酸或寡肽把水溶性的聚乙二醇与紫杉醇或者是把聚乙二醇与多烯紫杉醇键接起来构成紫杉醇或多烯紫杉醇的衍生化合物,特征在于在紫杉醇或多烯紫杉醇结构式中2’的位置OH上,键接PEG-[-(X)-CH#-[2]C(O)-A-NH-CH(R)-C=O]n基团取代H。本发明紫杉醇或多烯紫杉醇的前药,水溶性好,在人体内酶的调控作用下,达到缓释目的,制备成本低。

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