制作方法
1.培菌:现在应用的菌种有邬氏曲霉菌,编号3758;甘薯曲霉菌,编号3324;黄曲霉菌,编号3800;米曲霉菌,编号3384;黑曲霉诱变菌:AS3,4309(UV-11)。
黑曲霉菌以糖化型淀粉酶为主,生成的是葡萄糖,能为酵母菌直接利用;而且糖化的持续性长,其淀粉酶和蛋白酶的耐酸性也强,适于作为酒母及制酒的糖化剂。黄曲霉菌以液化型淀粉酶为主,生成糊精、麦芽糖及葡萄糖。其淀粉酶不耐酸,在发酵过程中容易受到抑制。
生产上以黑、黄曲霉菌混合使用为好,黑曲为主,黑曲的比例不得低于70%。如单独使用,只能使用黑曲。
(1)固体斜面培养基的制备:将大米用水淘洗干净后,每千克大米加水5千克左右,然后蒸1~2小时,使米充分蒸烂成粥状,取出散冷至60℃左右,在每千克大米煮成的粥中加米曲0.5千克,每千克米曲再补加55℃的温水4千克,搅拌均匀,在50~55℃温度下糖化3~4,然后再加热到90℃左右静置,取其澄清液用细布过滤。要求滤出之米曲汁呈淡黄色、透明,浓度为6.5~7波美度,酸度为0.2左右。取已调好的米曲汁,每100毫升加入琼脂2~3克,然后加热溶化。待琼脂完全溶化后趁热装入已灭菌的试管中,装入量约为试管容积的1/5左右,然后塞上棉塞,再用纸将棉塞包上,灭菌15~20分钟,或常压间歇灭菌3次(每隔24小时1次),每次30分钟,第一次、第二次灭菌后需放在温度为28~30℃的地方保存。
灭菌完毕,趁热将试管斜放,斜面长度约为试管的1/2。培养基凝固后,将试管平放于温度为25~30℃处6~7天,以便蒸发除去管壁上的水滴。经检查没有杂菌后,即可接种。
(2)接种培养:接种前先将手洗净,并用酒精擦洗灭菌,然后再将固体试管菌种,固体斜面培养基及其它用具用酒精(70~75%)仔细擦洗,并将试管的棉花头在酒精打上轻烧后放入无菌箱内。一手拿菌种和培养基试管,一手拿接种针在酒精灯火焰上灼烧,待冷却后拔去棉塞,并迅速把管口移近酒精打火焰。拔下的棉塞应用手指夹住,从进入无菌箱到移出无菌箱均不能使棉塞与箱底接触。然后把接菌针伸进菌种的试管内,将针头插进培养基内冷却一下,挑取健壮菌种少许,迅速伸入待接种的试管内,在离管底约0.5厘米处,由下向上轻轻地进行划线接种,但不可将培养基表面划破。接种完结,将塞入试管内部分的棉花头在火焰上轻烧后,塞入已接种的试管内。接种后必须将接种针灼烧灭菌后才能进行第2次接种。在接种过程中,拔去棉塞的试管口不能离开火焰。接种完毕方可熄灯,将试管取出分别贴好标签,注明菌名和接种日期,进行保温培养。
已接种的试管斜面置于恒温箱中30℃±1℃培养,约经3~4天,曲霉菌已发育成熟,取出试管经检查合格后,用于扩大培养或放在低温干燥处保管。
2.制曲:(1)扩大培养:取500~1000毫升三角瓶或12.5~15厘米培养皿,用水洗刷干净,烘干后,三角瓶塞上灭菌棉塞,培养皿用纸包好,在140~150℃干热灭菌1小时后备用。
取麸皮,每千克原料加水0.8~1千克,用粗布包好,放在蒸汽灭菌器中,蒸煮20分钟,取出散冷并充分搓碎疙瘩。如有被水浸湿的原料,要去除不用。
将蒸好的麸皮原料,分装于已灭菌的三角瓶或培养皿中。装料厚度为0.25~0.3厘米,加压(0.1兆帕)灭菌15~20分钟,或常压蒸汽灭菌3次,每次30分钟,取出降温至35℃以下。此时瓶壁或皿上附着凝结水,须旋转摇动瓶皿,使凝结水被原料吸收。但不要使原料粘在瓶壁或皿盖上,特别要严防原料与棉塞接触。
将灭菌完毕的瓶、皿,移入无菌箱内,每1只瓶子或皿接入2~3针孢子。接种完后,将瓶或皿移出无菌箱,充分摇匀。
接种后的瓶和皿,放于31~32℃的培养箱或恒温间中,恒温培养。
用三角瓶培养时,经10~12小时摇瓶1次,使瓶壁附着的凝结水为麸皮吸收。摇瓶后将麸皮摊平。再经4~8小时,菌丝蔓延生长,待麸皮刚刚连成饼时即可进行扣瓶。扣瓶时要将瓶轻轻震动倒放,使成饼的材料脱离瓶底悬起来,便于曲饼底部生长菌丝,并防止凝结水浸渍原料。扣瓶后要将瓶倒放,继续保持温度31~33℃。
用皿培养时,经过12~14小时摇皿1次。待孢子全部生成后,要除去皿盖上的水滴,即将皿盖稍稍提起,略为倾斜,使水滴通过盖边流到外边来。
接种后经65~72小时左右,曲菌已发育成熟,这时可由瓶、皿内取出曲饼,放进已灭菌的纸袋内,在不超过40℃的温度条件下进行充分干燥,使水分降到10%以下。然后将纸袋密封在低温干燥的地方妥善保存。保存时要严防吸潮,保存期最多不超过1个月。
(2)制曲种:①原料处理:麸皮100千克,配15千克酒糟,如原料过细,加入适量谷糠(5%左右)。每100千克原料如水89~90千克,加水用喷壶边加边搅拌。拌匀后过筛一次(筛孔直径3~4毫米),堆积润料1小时,然后放入小甑锅或蒸笼中蒸50~60分钟。也可将原料用粗布包起来,在麸曲蒸料时放在锅中间进行蒸煮。
②散冷接种:将已蒸好的原料,放在恒温室内灭过菌的木箱(槽)中,过筛一次,翻拌散冷到38℃左右接种,接种量约0.15~0.20%(采用扩大培养原菌种)。在接种时先用一小部分原料与扩大培养的菌种混合搓散,使霉菌孢子散布均匀,然后撒在其余的原料上。再翻拌2~3次,充分混合均匀并降温至30~34℃,用原来包原料的布包起来,放在离地面30厘米左右的木架上进行堆积保温。夏季也可以直接装盒,但直接装盒时应将原料推放在曲盒中而不摊平,原料的高度略低于曲盒的高度,以防将原料压紧。
③保温培养:堆积装盒:自接种开始装盒,是曲霉菌的发芽阶段。一般需经过5~6小时。堆积开始的品温应在30~32℃,曲料水分含量为50~53%,酸度为0.3~0.5。此时应控制室温在29℃左右,干湿球差1~2℃。大约经过3~4小时,进行松包翻拌一次,翻完后品温不得低于30℃。再包好,并经3~4小时即可装盒(曲料不经堆积直接装盒时,可将原料摊平)。装盒前将原料翻拌1~2次,装料厚度为0.5~0.8厘米。装盒时应轻松均匀,装完后用手摊平,使盒的中心稍薄,四周略厚些。搬曲盒时,应轻拿轻放,避免震动,并将其放在木架上摆成柱形,每箩为6~8个曲盒,最上层的曲盒应盖上草帘或空曲盒,避免原料水分迅速挥发。冬季箩与箩之间靠紧,夏季则可留2~4厘米的空隙。
装盒、拉盒:自装盒到拉盒(拉开)7小时左右是曲霉菌营养菌丝的蔓延阶段,装盒后品温应控制在30℃左右,室温仍控制在28℃,干湿球差1~1.5℃。装盒后4小时左右倒盒1次,柱形排列不变,只是上下调换曲盒位置,达到温度均一。再经3小时左右,品温上升到35℃左右时,进行拉盒。盒子都盖上已灭菌的显草帘摆“品”字形。草帘含水不宜过多,严禁有水滴入原料内。此时应控制品温不超过35℃。
保潮:拉盒24小时以内是曲霉生长子实体和生成孢子时期,即进入保潮期阶段。此时曲霉菌繁殖迅速、呼吸旺盛,品温应掌撑在35~36℃之间,最高不得超过37℃,室温控制在24~25℃,干温球差0.5℃。在保潮阶段应每隔3~4小时倒盒1次,如果品温上升过猛,除适当降低室温外,还可将曲盒之间的空隙加大,减少曲盒的层数,或将草帘折在一起,以散发热量。如果湿度不够,可以用冷开水喷雾或向地面洒水。保潮期间应撒开草帘1~2次,以散发二氧化碳和热量。如发现草帘干燥,应用冷开水浸湿后再盖上。
自装盒后约经10~12小时,曲料已连成饼状,可用无菌的玻璃将曲料划成2厘米左右小块,但不要划得太细,以免菌丝断裂而影响发育和生长。
排潮出室:拉盒24小时以后则为孢子成熟期,进入排潮阶段。此时可揭去草帘,品温有逐渐降低趋势,必须保持室温29~31℃,干温球差1~2℃,品温在36℃左右,保持14~16小时的霉菌已生长成熟。在此期间为使品温一致,还应倒盒1~2次。接种后过58~60小时即可出曲房进行干燥,干湿温度以不超过40℃为宜。干燥完毕后用盒保管。此即种曲,用于麸曲生产接种。
(2)麸曲的生产:①配料:配料比例:麸皮75~85%,鲜酒糟15~25%(以其风干量计算)。如原料较细,可加入5~10%谷糠以增加疏松透气程度。
制曲原料质量要求:麸皮必须是干燥不发霉的,酒糟应用当日生产的新鲜糟,并在蒸完酒出甑时趁热扬3~4次。垫窖糟,压霉糟,雨淋、腐烂发霉糟,酸度过高糟均不能使用。
②润料:加水:要求保证曲料在堆积时含有适宜水分,为此,须根据不同季节、气候和原料的吸水、排水性能等条件灵活掌握。通常蒸后曲料的含水量比蒸前增加1~2%左右。
100千克原料春、夏、秋季加水量为80~95千克。冬季加水量为70~85千克。
润料:将拌料场打扫干净,然后将麸皮摊开,边加水边搅拌。加完水后,用锨翻拌一次,再加入酒糟,过筛一次(筛孔4~6毫米),或用扬料机打一遍,消除疙瘩并堆成丘形。润料时间一般为1小时,冬季应适当延长。
③蒸料:打开甑锅汽门或加大火力,使锅水沸腾,然后铺好帘子,将已润好的曲料用簸箕和木锨装甑。装甑操作必须轻松均匀,并顶着汽装,装完后盖上草袋或草帘,蒸煮40分钟。
④散冷接种:接种地面应保持清洁,切忌有生料。散冷接种操作必须迅速,以减少杂菌侵入机会。蒸料完毕后,揭去锅上草袋,出甑过筛或用扬料机吹扬,充分打碎疙瘩,翻扬散冷到38~40℃左右,进行接种。接种数量按投入风干原料计算,每100千克料春、夏、秋季加曲种0.2~0.35千克,冬季为0.3~0.45千克。
接种时先将曲种加入两倍的熟曲料,充分搓散时孢子分布均匀,然后与大堆曲料混合翻拌1~2次,降温到32~34℃,即可入曲室堆积。
⑤堆积、装盒:堆积开始时,要求曲料含水量冬季为48~50%,春、夏、秋、秋季为52~54%,酸度为0.45~0.65,品温在31~32℃,室温为27~29℃。干湿球差1~℃。堆积时间:夏季4~7小时,冬季6~8小时。曲料入曲室后,如发现品温不均匀,可再翻拌1次,堆成丘形,堆积高度不超过60厘米,在堆积中心处插入温度计,每小时检查1次,约经3~4小时品温上升时翻拌1次,再经2~3小时即可装盒。
装盒前应将曲料拌均匀,分装于盒内摊平,要求装得轻松均匀,四周较厚,中心稍薄些。装盒时应轻拿轻放,以保持曲料疏松。曲盒应摆在木架上,每箩曲盒的重叠堆码高度以不超过4个为宜。冬天箩与箩之间应靠紧,夏天可留2~3厘米的空隙。窗口应用草袋或席子挡上,以防冷风侵袭。
⑥装盒、拉盒:装盒后品温约在30~31℃。室温应保持在28~30℃,干湿球差1℃,经3~4小时,品温上升到34~35℃,倒盒1次;现经3~4小时,品温上升到37℃左右,这时可把盒拉开,摆成“品”型,并根据品温、室温情况来调节盒与盒之间的距离。此时应控制品温在36℃左右,室温在28℃左右,干湿球差0.5~1.0℃。
⑦拉盒、扣盒:拉盒后曲霉菌的生殖和呼吸逐渐旺盛起来,应加强降温工作。这时要控制品温不超过39℃左右,室温下降到25~26℃,干湿球差0.5℃。拉盒后再经3~4小时应倒盒1次,以保持上下曲盒的温度均匀。再经3~4小时,肉眼可以看到菌丝蔓延生长,曲料连成饼状,试扣1盒不破不裂时,即可扣盒。
⑧扣盒、出曲室:扣盒方法一般是先把空盒扣成装料的曲盒上,轻轻翻过来,使顶面材料翻到下面来,盒底材料翻到上面来,散发热量和二氧化碳。
扣盒后曲霉菌繁殖很旺盛,品温猛烈上升,此时应将品温严格控制在40℃左右,保持室湿25~26℃,干湿球差0.5℃,并且每隔3~4小时倒盒1次,同时,要根据品湿变化情况,改变摆盒形式,调节盒与盒的距离,开放天窗或进行喷雾。扣拿后,保持品温39~40℃,室温28℃左右,干湿球差1~2℃。
自堆积开始经过28~34小时的培养,曲子淀粉酶活力达到高峰,即可出曲室。
⑨成品的贮存与保管:麸曲不适宜长期保管贮存,最好在出室后立即使用,一般贮存时间不超过24小时。如果必须延长贮存时间,应将曲子平铺在干燥的地面上,或放在曲盒内保存,以防止曲子吸潮和发热。一般每隔5~6小时检查一次品温,如果发现品温上升,应立即摊薄和翻拌降温。
质量标准
1.感官指标:结块紧而富有弹性,菌丝稠密且内外一致,无烧心和干皮,没有孢子或孢子极少,曲香味浓,没有酸臭味及其它怪味,颜色鲜者为好曲,糖化力高。
2.理化指标:测定曲中所含淀粉酶的活力,通常测定曲子的液化力和糖化力。UV-11菌种为3000单位以上,乌沙米曲霉和东酒1号为800单位以上。
3.显微镜检查:菌丝粗壮整齐,无异状菌丝,杂菌少。